【革兰染色步骤】革兰染色是微生物学中一种经典的细菌染色方法，由丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·格兰（Hans Christian Gram）于1884年发明。该方法通过不同的染色反应将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两大类，广泛应用于细菌的初步鉴定与分类。
一、染色原理简述
革兰染色的核心原理是基于细菌细胞壁结构的差异。革兰阳性菌细胞壁较厚，主要由肽聚糖组成，能保留结晶紫染料；而革兰阴性菌细胞壁较薄，且含有较多脂类物质，容易被酒精脱色。
二、染色步骤总结
以下是革兰染色的标准操作流程，按顺序列出：
| 步骤 | 操作内容 | 目的 |
| 1 | 取菌液涂片并干燥 | 制备单层细菌涂片，便于观察 |
| 2 | 固定涂片（通过火焰或化学固定） | 防止细菌被洗掉，保持细胞形态 |
| 3 | 滴加结晶紫染液（约1分钟） | 对所有细菌进行初染 |
| 4 | 水洗，去除多余染液 | 清除未结合的染料 |
| 5 | 滴加碘液（卢戈氏碘液），作用1-2分钟 | 增强结晶紫与细胞壁的结合力 |
| 6 | 水洗 | 去除多余的碘液 |
| 7 | 滴加95%乙醇或丙酮脱色（约10-30秒） | 脱去革兰阴性菌的染色 |
| 8 | 水洗 | 去除脱色剂 |
| 9 | 滴加复红或沙黄复染液（约1分钟） | 对脱色后的细菌进行复染 |
| 10 | 水洗并干燥 | 完成染色，准备显微镜观察 |
三、结果判断
- 革兰阳性菌：呈紫色（因保留了结晶紫）
- 革兰阴性菌：呈红色（因脱色后被复红染色）
四、注意事项
- 涂片不宜过厚，否则影响染色效果。
- 脱色时间需控制得当，过长会导致假阴性。
- 染色过程中应避免过度干燥，以免破坏细胞结构。
- 实验结束后应及时清洗实验器材，防止交叉污染。
通过以上步骤，可以清晰地区分细菌种类，为后续的病原检测、药物敏感性测试等提供重要依据。掌握革兰染色技术是微生物实验人员的基本功之一。